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hplc的基本原理是什么(HPLC原理是什么)

导读 您好,今天帅帅来为大家解答以上的问题。hplc的基本原理是什么,HPLC原理是什么相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、原理:...

您好,今天帅帅来为大家解答以上的问题。hplc的基本原理是什么,HPLC原理是什么相信很多小伙伴还不知道,现在让我们一起来看看吧!

1、原理:储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别。

2、被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据就可以以图谱形式打印出来,以便研究人员分析。

3、扩展资料:高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。

4、①高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。

5、②高速:分析速度快、载液流速快,较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。

6、③高效:分离效能高。

7、可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果,比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

8、④高灵敏度:紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。

9、⑤应用范围广:百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势。

10、⑥柱子可反复使用:用一根柱子可分离不同化合物⑦样品量少、容易回收:样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。

11、此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点,但也有缺点,与气相色谱相比各有所长,相互补充。

12、高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。

13、在从进样到检测器之间,除了柱子以外的任何死空间(进样器、柱接头、连接管和检测池等)中,如果流动相的流型有变化,被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽,柱效率降低。

14、高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。

15、HPLC使用的色谱柱是很细的(1~6 mm),所用固定相的粒度也非常小(几μm到几十μm),所以流动相在柱中流动受到的阻力很大,在常压下,流动相流速十分缓慢,柱效低且费时。

16、为了达到快速、高效分离,必须给流动相施加很大的压力,以加快其在柱中的流动速度。

17、为此,须用高压泵进行高压输液。

18、高压、高速是高效液相色谱的特点之一。

19、HPLC使用的高压泵应满足下列条件:a. 流量恒定,无脉动,并有较大的调节范围(一般为1~10 mL/min);b. 能抗溶剂腐蚀;c. 有较高的输液压力;对一般分离,60×10^5Pa的压力就满足了,对高效分离,要求达到150~300×10^5Pa。

20、⑴往复式柱塞泵当柱塞推入缸体时,泵头出口(上部)的单向阀打开,同时,流动相进入的单向阀(下部)关闭,这时就输出少量的流体。

21、反之,当柱塞向外拉时,流动相入口的单向阀打开,出口的单向阀同时关闭,一定量的流动相就由其储液器吸入缸体中。

22、这种泵的特点是不受整个色谱体系中其余部分阻力稍有变化的影响,连续供给恒定体积的流动相。

23、⑵气动放大泵其工作原理是:压力为 p1 的低压气体推动大面积( SA )活塞A ,则在小面积( SB )活塞 B 输出压力增大至 p2 的液体。

24、压力增大的倍数取决于 A 和 B 两活塞的面积比,如果 A 与 B 的面积之比为 50 : 1 ,则压力为 5 × Pa 的气体就可得到压力为 250×Pa 的输出液体。

25、这是一种恒压泵。

26、参考资料:百度百科——高效液相色谱。

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