一、梯度洗脱应用？
1、灵敏度高：大多数仪器分析法适用于微量、痕量分析。例如，原子吸收分光光度法测定某些元素的绝对灵敏度可达10^-14g。电子光谱甚至可达10^-18g，相对灵敏度可在??－1，ng?－1乃至更小。
2、取样量少：化学分析法需用10^-1～10^-4g；仪器分析试样常在10^-2～10^-8g。
3、在低浓度下的分析准确度较高：含量在10-5%～10-9%范围内的杂质测定，相对误差低达1%～10%。
4、快速：例如，发射光谱分析法在1min内可同时测定水中48个元素，灵敏度可达ng?－1级。
5、可进行无损分析：有时可在不破坏试样的情况下进行测定，适于考古、文物等特殊领域的分析。有的方法还能进行表面或微区（直径为?级）分析，或试样可回收。
6、能进行多信息或特殊功能的分析：有时可同时作定性、定量分析，有时可同时测定材料的组分比和原子的价态。放射性分析法还可作痕量杂质分析。
7、专一性强：例如，用单晶X衍射仪可专测晶体结构；用离子选择性电极可测指定离子的浓度等。
8、便于遥测、遥控、自动化：可作即时、在线分析控制生产过程、环境自动监测与控制。
9、操作较简便：省去了繁多化学操作过程。随自动化、程序化程度的提高操作将更趋于简化。
10、仪器设备较复杂，价格较昂贵。
二、梯度洗脱的原则？
梯度洗脱又称为梯度淋洗或程序洗脱。指的是在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比。
在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
三、梯度洗脱改变的是？
梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，广泛采用程序升温的方法。
而在液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。
在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
四、梯度洗脱检测要求？
梯度洗脱是指在同一个分析周期中随着时间的变化按一定程序梯度性地改变洗脱液的比例(浓度配比、成分、离子强度、溶液极性等)或pH，以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。从而可以使一个复杂样品中性质（极性）差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。梯度洗脱一般分为二元高压梯度，二元低压梯度和四元低压梯度；二元高压梯度需要两台高压泵，二元低压梯度和四元低压梯度都是只需要一台高压泵和一个比列阀。
梯度洗脱的原理
具体地讲，当样品随梯度起点的流动相进入色谱柱入口时，由于起点流动相中弱洗脱溶剂A含量较高，强洗脱溶剂B含量较低，化合物C1(保留性适中)和化合物C2(保留较强)因分配系数(k值)较高而滞留于色谱柱入口附近，几乎未移动。一段时间后，B增加到一定数值，C1的k值达到足够小(比如小于10)，其在柱中的移动速率明显增大，并且随着B的增加，其移动速率愈加快速，直到tC1时流出色谱柱，被检测器检测到并被记录成色谱峰C1，tC1虽然比等度时的保留时间长很多，但C1的的平均k值却很小，因而色谱峰并未展宽，灵敏度仍处于较高水平。B持续增加，在随后的某个时间点，C2的k值也降到10以下，C2的移动速率也开始变快，以与C1类似的方式于tC2被洗脱出色谱柱，其平均k值同样很小，色谱峰亦未展宽，灵敏度处于较高水平。
流动相的梯度变化即流动相极性、PH值等的梯度变化，即洗脱能力成梯度变化。
洗脱要求
1.洗脱液体积应足够大，一般要几十倍于床体积，从而使各峰完全或基本分离；
2.梯度的上限（强洗脱溶剂的比例）要足够高，使紧密吸附的物质能被洗脱下来。
3.梯度不要上升太快，要恰好使移动的区带在快到柱末端时达到解吸状态。目的物的过早解吸，会引起区带扩散；而目的物的过晚解吸会使峰形过宽。
五、梯度洗脱实验步骤？
指在分离过程中逐渐改变溶剂的组成，使溶剂强度从分离开始到结束逐渐增加；使每个被洗脱的色谱峰在流经全柱时，其容量因子（K）能保持或接近最佳值。
在色谱法中，对一组复杂的组分能否得到满意的分离，与选择适当的溶剂洗脱有很大的关系，有时使用单一的溶剂不能达到分离，往往需要采用梯度洗脱才能得到满意的结果。所谓梯度洗脱就是将两种或两种以上不同极性但可以互溶的溶剂，随着时间改变使按一定比例混合，以连续改变冲洗液的极性，使复杂组分得到良好的分离。
例如在液相色谱中，梯度淋洗装置有两类：
①外梯度淋洗：又称低压梯度淋洗，即将溶剂在常压下，通过程序控制器使溶剂按一定比例混合后再输入高压泵。
②内梯度淋洗：又称高压梯度淋洗，这是将溶剂经高压泵加压后再混合的淋洗装置。
六、ph梯度洗脱顺序？
对于反相的HPLC，梯度洗脱的流动相是有机相比例从小到大，水从大到小。 作为方法建立，可选择如下步骤：
1. 乙腈-水（0：100）-（100：0），没有选甲醇的原因是甲醇-水粘度大（尤其在与水大概55：45时），这样如果可以换等度的时候柱压较高，又有背压调节的问题；
2. 根据若干目标物出峰的时间，可以大致推算当时的流动相比例范围，找到1个比较精确的梯度表，注意，因为有柱前体积，出峰时刻显示的流动相比例与实际的柱上比例是有滞后的；
3. 进一步的调整，以达到满意的分离效果，和尽量短的分析时间；
4. 目标物如果是可解离的（酸性物质或碱性物质），水相中可以加入酸（和或三乙胺），或用buffer，如果是蛋白质、肽类，一般可加入三氟乙酸；
5. 能够进一步调整的还有柱温和流速。 就我个人的意见，如果能用等度，还是尽量用等度洗脱。
七、什么是梯度洗脱？
梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH，以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。
梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。 梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。
分级梯度洗脱
分级梯度洗脱是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相是离子交换剂，它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。离子交换剂可以分为三部分：高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子。电荷基团与高分子聚合物共价结合，形成一个带电的可进行离子交换的基团。平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子，它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用，称为阳离子交换剂；平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用，称为阴离子交换剂。
八、怎么确定洗脱梯度？
梯度性地改变洗脱液的组分(成分、离子强度等)或pH，以期将层析柱上不同的组分洗脱出来的方法。
梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
在气相色谱中，为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期，广泛采用程序升温的方法。而在液相色谱中则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。 梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。
分级梯度洗脱
分级梯度洗脱是依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化的。离子交换层析的固定相是离子交换剂，它是由一类不溶于水的惰性高分子聚合物基质通过一定的化学反应共价结合上某种电荷基团形成的。离子交换剂可以分为三部分：高分子聚合物基质、电荷基团和平衡离子。电荷基团与高分子聚合物共价结合，形成一个带电的可进行离子交换的基团。平衡离子是结合于电荷基团上的相反离子，它能与溶液中其它的离子基团发生可逆的交换反应。平衡离子带正电的离子交换剂能与带正电的离子基团发生交换作用，称为阳离子交换剂；平衡离子带负电的离子交换剂与带负电的离子基团发生交换作用，称为阴离子交换剂。
九、hplc操作梯度洗脱的意义？
梯度洗脱（gradient elution）又称为梯度淋洗或程序洗脱。在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。但有时引起基线漂移。
十、反相色谱梯度洗脱的标准？
液相色谱有正相和反相之分。正相色谱和反相色谱还有吸附色谱和极性化学键键合色谱之分。如果采用固定相的极性大于流动相的极性，就称为正相色谱；如果固定相的极性小于流动相的极性，则称为反相色谱。
在液质联用中，一般均使用极性溶剂进行洗脱。反相色谱中洗脱强度顺序为：水<甲醇<乙腈<乙醇≈丙酮，亲水作用色谱中洗脱强度顺序为：丙酮<乙腈<乙醇<甲醇<水。通常可以通过改变流动相的溶剂强度和类型来改善化合物的保留和选择性。