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审核：广州中医药大学第一附属医院 王海彬教授
文章所属：王海彬教授团队，转发请标明出处。
一、基本原理
PCR是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA的合成，不断重复可以扩增目的DNA片段，由于新合成的DNA也可作为模板，因此合成量呈指数增长。
而实时荧光定量PCR技术，则是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
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实验步骤：
一、样品RNA的抽提
离心机提前4°预冷
1. 细胞裂解或组织匀浆。a. 贴壁细胞 吸走培养基，6孔板每孔1ml Trizol，12孔板0.5ml b. 悬浮细胞 离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万动植物或酵母细胞，或一千万细菌，加入1ml Trizol。用枪吹打或适当vortex，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。c. 组织 组织剪成小块研磨。每50mg-80mg组织加入1ml Trizol，裂解20min，对于RNA完整性要求比较高的情况，应用液氮保存组织。2. 吹打，室温裂解5min。3. 每毫升Trizol加入200ul氯仿，vortex混匀或剧烈上下震荡15-30s，室温静置3min4. 12000g 4℃离心15min，吸取含总RNA的上层无色水相至一新的离心管中，大约350ul（每毫升Trizol约可吸取0.5-0.55ml）。5. 按每毫升最初的Trizol加入500ul异丙醇，吹打混匀，室温静置10min。6. 12000g 4℃离心10min，弃上清，（用枪把EP管口出废液吸走），在管底可见RNA沉淀。7. 每毫升最初的Trizol加入1ml 75%无水乙醇(用DEPC水稀释)，不用吹打。8. 7500g 4℃离心5min，弃上清，用200ul枪头吸走管口及盖子液体，用泵头套白色小枪头吸走EP管残余水珠，每个样本需更换枪头)倒扣在卫生纸上静置5min。[或用离心机甩一下（>5,000rpm, 离心1秒），小心吸尽液体]
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二、RNA质量检测
1. 紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
（1）纯度检测：RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。
三、样品cDNA合成
1. 反应体系：一般根据所购买试剂盒操作步骤执行
2. 混合液在加入逆转录酶之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5 μl，37℃水浴60分钟。
3. 取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。
四、梯度稀释的标准品及待测样品的管家基因（β-actin）实时定量PCR
1. 反应体系如下：参照所使用的试剂盒。
2. 制备好的阳性标准品和检测样本同时上机，反应条件为：93℃ 2分钟，然后93℃ 1分钟，55℃ 2分钟，共40个循环。
2、1毫升等于多少ul：1ml等于多少ul
1000微升。毫升是一个容积单位，跟立方厘米对应，容积单位的主单位是升。
1升等于1000毫升，1000毫米等于1000立方厘米，1000毫升等于1立方分米。
升是一个容积单位。升在国际单位制中表示为L，其次级单位为毫升。1L=1000mL 1000毫升=1000立方厘米 =1立方分米1毫升=1西西(cc).1毫升液态水=1立方厘米液态水1毫升液态水在4摄氏度时的重量为1克。1毫升=1立方厘米mL即毫升，计量单位。
当计量单位用字母表达时，一般情况单位符号字母用小写；当单位来源于人名时，符号的第一个字母必须大写。只有体积单位“升”特殊，这个符号可写成大写L，又可写成小写的l。这是因为“升”的符号最早是小写的，由于小写l与阿拉伯数字1难以分辨，后来国际计量大会作出决议，“升”的符号可以写成大写L，这样在小写尚未废除的情况下，大小写并用。
这是国际单位制中唯一并非来源于科学家名字命名而可以使用大写的符号。按照国际单位书写要求，用于表示毫（10^-3）的字母为“m”，不得与表示兆（10^6）的字母“M”混用。微升是容积单位，缩写或符号为μL，相当于 1,000,000分之一升。
1微升 = 0.001 立方厘米；1微升 = 1 立方毫米；1微升 = 1 000 纳升；1微升 = 0.001 毫升。1立方米（m³）=1000立方分米（dm³）=1000000立方厘米（cm³）=1000000000立方毫米（mm³）。1升（L）=0.001立方米（m³）=1立方分米（dm³）=1000毫升（ml）=1000立方厘米（cm³）=1000000立方毫米（mm³）。
1 立方英寸=0.016387 立方分米=16.387立方厘米=16387立方毫米。1立方英尺=28.3立方分米=28300立方厘米=28300000立方毫米。1 立方码=27 立方英尺=0.7646 立方米=164.6立方分米=164600立方厘米=164600000立方毫米。
1ml等于多少ul？
1ml等于1000ul。解：毫升(ml)、微升(ul)、立方厘米都是体积单位。
因为1微升=0.001立方厘米，1立方厘米=1毫升。
那么1毫升(ml)=1立方厘米1立方厘米=1÷0.001微升=1000微升。所以1毫升=1000微升。即1ml等于1000ul。扩展资料：1、体积的基本单位体积基本单位有立方米、立方分米、立方厘米、升、毫升。
2、体积单位之间的换算1立方米=1米x1米x1米=1000立方分米、1立方分米=1分米x1分米=1分米=1升=1000立方厘米1立方厘米=1厘米x1厘米x1厘米=1毫升。3、体积测量工具 常用的体积测量工具有量筒、量杯。
1uL是多少mL?
1微升=0.001毫升，以下仅做参考1 000 000 皮米(pm) = 1 微米(μm) 1 000 纳米(nm) = 1 微米(μm)0.001 毫米(mm) = 1 微米(μm)0.000 1 厘米(cm) = 1 微米(μm)0.000 01 分米(dm) = 1 微米(μm)0.000 001 米(m) = 1 微米(μm)0.000 000 001 公里(km) = 1 微米(μm)0.000 001 微米(μm) = 1 皮米(pm)0.001 微米(μm) = 1 纳米(nm)1 000 微米(μm) = 1 毫米(mm)10 000 微米(μm)= 1 厘米(cm)100 000 微米(μm) = 1 分米(dm)1 000 000 微米(μm) = 1 米(m)1 000 000 000 微米(μm) = 1 公里(km)1mg等于多少ul
mg/ml和ug/ul都是化学的基本单位。mg是毫克，质量单位 ml毫升，容积单位两者是不可以换算的，但可以根据质量=密度x体积来求某种液体的质量。
1mg/ml = 1000ug/ml , 1ug/ml =0.001mg/ml。
1mg=1000ug，1ml=1000ul，两个都是1000进位。单位换算1毫克 = 1000微克 （1.0× μg）。200 毫克 = 1克拉（1.0 Ct）。1000 毫克 = 1 克（1.0 g）。
5 克拉 = 1 克。1微克=1000纳克（1.0× ng）。1000 000毫克=1千克（1.0 kg）.。
1克=1000毫克.。
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