本篇目录:
1、用4%多聚甲醛固定的活体组织还能不能进行RT-PCR检测?2、TUNEL分析3、流式-多聚甲醛4、多聚甲醛水分的测定5、多聚甲醛检测方法?6、多聚甲醛固定后组织膨胀的原因用4%多聚甲醛固定的活体组织还能不能进行RT-PCR检测?
用酒精的的话,不是用来固定的,是脱水用的,脱水后是要放100%的乙醇中冻与-20度的。固定式用4%的多聚甲醛4度过夜。
脑组织较软,且细胞成分不易保留,脑组织是较易软化的组织之一,血供也较为丰富,所以最好是在取脑组织前用4%多聚甲醛灌注固。经前固定后,取脑操作时,可减少脑组织损伤。
意思就是用多聚甲醛固定过的样本,必须在4小时内检测,否则容易导致串联染料降解,若要长时间保存,还是需要洗涤后,转移到不含多聚甲醛的缓冲液中。
组织脱水:过度固定可能会导致组织脱水,这可能会影响组织的结构和功能。总之,泡久了可能会对大鼠脑组织产生一些不可逆的影响,影响后续的研究和观察。
固定:加入4%多聚甲醛(PBS配制)固定20分钟。如暂时不能立即做组化检测,使用含0.4%多聚甲醛的PBSPH4浸泡细胞(免疫组化检测完成前不要让细胞变干,否则细胞收缩形态不好)。
TUNEL分析
TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3-OH形成,很少能够被染色。由此,TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。
TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)是检测细胞凋亡的经典方法。
TUNEL 还可结合细胞同期的分析,可同时了解凋亡细胞DNA 断裂和细胞周期分布之间的关系,近来已成为鉴别和定量凋亡细胞的最常用方法之一。
三tunel测凋亡的荧光压制滤板 压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过,提供相应波长范围的荧光。与激发滤板相对应,常用以下3种压制滤板:紫外光压制滤板:可通过可见光、阻挡紫外光通过。能与UG-1或UG-5组合。
采用缺口末端标记技术TUNEL法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化。 采用RT PCR检测K562细胞中Ras分子和PI3K AKT信号通路的n ras, pi3k, akt1, nf κb1 mRNA的差异表达。
用流式细胞仪/荧光显微镜机观察一下不就可以了么?检测凋亡细胞的绿色荧光及PI/DAPI的红色/蓝色荧光)上机分析一下就能看到凋亡和没有凋亡的细胞了。
流式-多聚甲醛
如果检测的是前述表格中 不会受多聚甲醛影响的分子 ,可用 1%多聚甲醛 预固定保存,但FSC、SSC和荧光强度影响较大,如需避免此类缺点,可考虑流式中文网研发的 细胞保存液 ()。
多聚甲醛不可以直接跑流式。多聚甲醛是一种固态聚合物,具有不规则的颗粒形态。其具有温度敏感性,一般需加热到100℃以上才能溶解于水中,然后再进行处理。
多聚甲醛溶液对呼吸道有强烈刺激性,引起鼻炎、咽喉炎、肺炎和肺水肿。对呼吸道有致敏作用。 眼直接接触可致灼伤。对皮肤有刺激性,引起皮肤红肿。口服强烈刺激皮肤长期反复接触引起干燥、皲裂、脱屑。
多聚甲醛之所以能够起到很好的固定效果,和它的制作工艺、物理性质和化学性质是分不开的。
一 般来说都是将细胞悬液离心并弃上清后加入固定液,我们加的是70%的冰乙醇,加的量根据你细胞的多少。你这个涉及的测蛋白,那么加多聚甲醛的量和时间可能 要控制得严一些才能保证最低限度不破坏a-SMA的结构。
多聚甲醛水分的测定
1、mLm---试样的质量,g0.03003---与00mL盐酸标准滴定溶液{m(HCl)=0.1000l/L}相当的多聚甲醛解聚后单体的质量 ,g多聚甲醛甲醛含量的测定通常采用碘量法、酸碱滴定法。
2、多聚甲醛甲醛含量的测定通常采用碘量法、酸碱滴定法。
3、用多聚甲醛配制称取280g多聚甲醛,加约700mL水和35mL氨水(GB631-77),加热溶解后趁热过滤或静置两天后取上清液,按下述规定的试验方法测定甲醛含量,再配制成约250g·L-1的甲醛溶液。
4、一粒一粒的加),很快多聚甲醛就会 融解澄清。测试溶液PH,用磷酸调节PH=4。容量瓶定容至 100 ml。将该100ml 8%的多聚甲醛溶液与等体积的 0.2M 的PB溶液混合,普通滤纸过滤即可。
多聚甲醛检测方法?
1、因此,在进行流式细胞仪操作之前,需要先将多聚甲醛进行适当的处理,如通过酶处理、切割粉碎等方法将其转化为可操作的形态。流式细胞仪是一种可以实现高通量实验的生物学实验仪器,广泛应用于细胞免疫学和细胞生物学等领域。
2、如果检测的是前述表格中 容易被多聚甲醛影响的分子 ,请 尽量不要预固定 ,如需长期保存样本,可以考虑冻存单个核细胞。
3、本方法适用于脲醛树脂、三聚氰胺甲醛树脂和尿素一三聚氰胺甲醛树脂的游离甲醛含量测定。试样中游离甲醛、半缩醛与过量的亚硫酸钠溶液在0℃反应,生成羟甲烷基磺酸盐。用碘溶液滴定过量的亚硫酸钠。
4、一般情况下甲醛液体在较冷时久贮易混浊,在低温时则形成三聚甲醛沉淀。蒸发时有一部分甲醛逸出,但多数变成三聚甲醛。本品为强还原剂,在微量碱性时还原性更强。在空气中能缓慢氧化成甲酸。
5、f. 转步骤5。 a. 收集细胞(不超过200万细胞),PBS或HBSS洗涤一次。b. 用4%多聚甲醛固定细胞30-60分钟。为防止细胞聚集成团,宜在侧摆摇床或水平摇床上缓慢摇动的同时进行固定。c. 用PBS或HBSS洗涤一次。
多聚甲醛固定后组织膨胀的原因
多聚甲醛之所以能够起到很好的固定效果,和它的制作工艺、物理性质和化学性质是分不开的。
固定过度:多聚甲醛是一种有效的细胞固定剂,但过度固定可能会导致组织结构变形或收缩。这可能会影响对组织结构和功能的观察和研究结果。 抗原失活:在多聚甲醛中泡久了可能会影响某些抗原的免疫反应性。
在这里应该想到做western blot时用5%脱脂乳粉封闭,原因之一是为了将NC膜或PVDF膜上的未能结合蛋白的孔隙封闭住,防止二抗结合到孔内造成背景色,原因之二就是封闭其他的可能会与一抗结和的杂蛋白。
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