高效液相色谱仪的使用1。启动时设置参数(检测波长、流速)，更换所需流动相，检查色谱柱是否正确。
2.排空并更换管道中的流动相，冲洗进样阀并清洗进样针。
3.冲洗色谱柱进行平衡，在此期间可以对样品进行处理，并预先登记样品信息。
4.平衡良好后，进入空白试验，消除系统污染。
5.待色谱柱稳定后，进样，等待操作结束(期间清洗进样针)，计算积分，出具报告。
具体操作步骤如下：
1、开机操作：
(1)、打开电源，连接Harb，注意Harb电源，打开电脑，打开Bootp服务器(一般启动时打开)；
(2)从上到下打开各部件的电源。当Bootp服务器显示有信号(六行字符)时，打开工作站(先打开联机)；
(3)打开冲洗泵头的10%异丙醇溶液的开关(用针针刺和抽)，控制流量，以能流出的最小流量为准；
(4)注意每个流动相剩余溶液的体积设置。如果设定的体积低于最小限制，泵将自动停止。注意泵洗涤液的体积，及时补充液体。
(5)使用过程中要经常观察仪器的工作状态，及时正确处理各种突发情况。
2.用用过的流动相冲洗系统一定时间(如果用过的流动相是生理盐水流动相，必须用水冲洗20分钟以上才能换成生理盐水流动相)，在正式样品分析前30min左右打开D灯或W灯，延长灯的使用寿命；
3.建立色谱操作方法，注意保存以自己命名的方法，不要覆盖或删除他人的方法和实验结果；
4.使用手动注射器注射时，注射前后应使用针头清洗液清洗注射器。一般来说，针洗液应选择与样品溶液一致的溶剂。注射前，必须用样品溶液清洗注射器3次以上，并消除注射器内的气泡。
5.溶剂瓶中的砂滤器头容易破碎，更换流动相时要注意保护。当发现过滤头脏污或有细菌滋生时，不允许用超声波清洗，但可以用5%的稀硝酸溶液浸泡后再清洗；
6.实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇溶液冲洗整个管道30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗时关闭d灯和w灯；
7.关机时，关闭泵、检测器等。首先，关闭工作站，然后关闭机器。最后，自下而上关闭色谱仪各部件，关闭泵液冲洗开关；
8.用户应认真执行仪器使用登记制度，不要擅自拆卸仪器。
流动相：
1.流程应选择色谱纯试剂、高纯水或双蒸水。酸碱溶液和缓冲溶液在使用前应过滤。过滤时注意水基膜和油基膜的适用范围。
2.水相的流动相需要经常更换(一般不超过2天)，防止细菌滋生变质；
3.使用双泵时，在A、B、C、D四个相当中，如果使用的流动相中有含盐流动相，则将含盐流动相放在A、D中(进液口在混合器下方)，无盐流动相放在B、C中(进液口在混合器上方)；
四个容器A、B、C和D中的一个是棕色瓶子，用于储存水相和流动相。
样本：
1.过滤或离心样品，以确保其不含固体颗粒；
2.使用流动相或弱于流动相(如果是反相柱，极性大于流动相；如果是正相柱，极性小于流动相)，尽量用流动相配制样品溶液；
手动注射时，注射量应尽可能小。当使用定量管时
高效液相色谱仪特点：——高压可达150 ~ 300 kg/cm2。色谱柱每米压降大于75 kg/cm2。
高速3354流量0.1 ~ 10.0 ml/min。
高效3354塔盘的数量可达5000个/m。一根色谱柱可同时分离多达100种组分。
高灵敏度——紫外检测器的灵敏度为0.01ng。同时，消耗的样品更少。
与经典液相色谱相比，高效液相色谱具有以下优点：
Fast ——通常情况下，分析一个样品需要15 ~ 30min，有的样品甚至可以在5 min内完成。
——的高分辨率，固定相和流动相均可选择，达到最佳分离效果。
——紫外检测器灵敏度可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。
色谱柱可以重复使用——。一根色谱柱可以分离不同的化合物。
样品量少，易于回收。——的样品通过色谱柱后不会被破坏，可以采集单一组分或进行制备。
应用高效液相色谱只要求样品可以制成溶液，不受样品挥发性的限制。流动相选择范围广，固定相种类多，可以分离各种分子量范围的热不稳定和不挥发、解离和未解离的物质。
结合样品预处理技术，高效液相色谱实现的高分离度和高灵敏度使得分离和同时测定具有非常相似性质的物质以及分离复杂相中的痕量组分成为可能。随着固定相的发展，有可能完成具有足够活性的生化物质的分离。
高效液相色谱法已成为解决生化分析问题的最有前途的方法。高效液相色谱具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可重复使用、流出液组分易于收集等优点，广泛应用于生物化学、食品分析、医学研究、环境分析、无机分析等领域。高效液相色谱与结构仪器的结合是一个重要的发展方向。
液相色谱-质谱联用技术越来越受到重视，如氨基甲酸酯类农药和多核芳香烃的分析。液相色谱与红外光谱的结合也得到了迅速发展，如在环境污染分析中测定水中的烃类和海水中的非挥发性烃类，使环境污染分析得到了新的发展。
标签：样品色谱流动