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双缩脲反应 双缩脲法

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一、双缩脲反应

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一、双缩脲反应

缩二脲法原理缩二脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中能与铜离子生成紫红色络合物,称为缩二脲试验。由于蛋白质中有许多肽键,也能与铜离子进行缩二脲试验,颜色深浅与蛋白质含量的关系在一定范围内符合比尔定律,与蛋白质的氨基酸组成和分子量无关。因此,双缩脲法可以用来测定蛋白质的含量。缩二脲试验主要与肽键有关,所以受蛋白质特异性的影响较小。而且所用试剂廉价易得,可测定范围为1 ~ 10 mg蛋白质,适用于精度要求不高的蛋白质含量测定。蛋白质的可检测含量必须在0 . 5毫克以上。双缩脲法的缺点是灵敏度差,样品量大。干扰此测定的物质包括缓冲液,其性质为氨基酸或肽,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性显色反应,铜离子易被还原,有时会出现红色沉淀。

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